chirurdzy przemyśl czesc 4

Ekspresja powierzchniowa HRF20 i DAF na granulocytach od pacjenta, jego rodziców i osób normalnych w analizie komórek sortowanych za pomocą fluorescencji. Granulocyty pacjenta były całkowicie pozbawione HRF20, a jego rodzice mieli zmniejszoną ekspresję. Natomiast ekspresja powierzchniowa DAF u pacjenta i jego rodziców była podobna do tej u zdrowych osób. Przerwane krzywe oznaczają ekspresję na komórkach wybarwionych niezwiązanymi (kontrolnymi) przeciwciałami monoklonalnymi. Po analizie za pomocą aktywowanego fluorescencją sortera komórek, erytrocyty i granulocyty od normalnych osobników, które zostały wybarwione przeciwciałami monoklonalnymi anty-DAF, anty-HRF20, anty-LFA3 i anty-acetylocholinoesterazą wykazywały zwiększoną intensywność fluorescencji (Fig. i 2). W erytrocytach od pacjenta i jego rodziców powierzchnia DAF, acetylocholinoesteraza i LFA-3 wykazywały prawie taką samą intensywność fluorescencji, jak na komórkach od zdrowych osób (ryc. 1). W przeciwieństwie do tego, nie było powierzchniowej ekspresji HRF20 na komórkach od pacjenta, a poziom ekspresji wynosił 30 procent i 50 procent tego w normalnych erytrocytach na komórkach odpowiednio od matki i ojca (Fig. 1). Ponadto, granulocyty pacjenta były całkowicie pozbawione HRF20, a oboje rodzice mieli obniżoną ekspresję HRF20 w tych komórkach (ryc. 2). Jednak ani pacjent, ani jego rodzice nie wykazywali żadnego niedoboru powierzchni granulocytów DAF (Fig. 2) lub LFA-3 (dane nie pokazane). Wyniki te wskazują, że pacjent ma pełny niedobór HRF20, a jego rodzice mają częściowy niedobór HRF20 zarówno na erytrocytach, jak i granulocytach, podczas gdy wszyscy mają normalny poziom ekspresji DAF, acetylocholinesterazy i LFA-3 na tych komórkach. Kontrole barwione niespokrewnionymi przeciwciałami monoklonalnymi były negatywne.
Badania immunohistochemiczne
Figura 3. Figura 3. Ekspresja immunohistochemiczna DAF i HRF20 na hodowanych fibroblastach. Fibroblasty wybarwiono anty-DAF lub anty-HRF20, jak opisano w Metodach. Barwienie DAF jest silne na komórkach zarówno od zdrowych osób, jak i od pacjenta. Chociaż HRF20 jest widoczny w komórkach od zdrowego osobnika, barwienie anty-HRF20 jest ujemne u pacjenta. (Metoda ABC, z barwieniem kontrastowym przy użyciu zieleni metylowej; × 200).
Wyniki analizy komórka-sorter podniosły kwestię, czy HRF20 był obecny na powierzchni niehematopoetycznych komórek somatycznych pacjenta. Dlatego hodowane fibroblasty i tkanki skóry pacjenta i normalnych osobników badano zgodnie z metodą ABC. Natychmiast zaobserwowano immunobarwienie powierzchniowe przeciwciałami fibroblastów anty-DAF i anty-HRF20 od osób zdrowych (ryc. 3). Podobnie jak fibroblasty zdrowych osobników, pacjentki intensywnie barwiły anty-DAF, ale nie barwiły anty-HRF20 (ryc. 3). HRF20 wykryto w skrawkach skóry od zdrowych osobników, na powierzchni keratynocytów naskórka, komórek wydzielniczych potu i gruczołów łojowych, komórek mieszków włosowych i śródbłonka naczyniowego, ale nie wykryto ich w skrawkach skóry. od pacjenta (dane nie przedstawione). Kontrolne badania immunohistochemiczne były negatywne.
Dyskusja
Stwierdzono, że erytrocyt od pacjentów z napadową nocną hemoglobinurią wykazuje niedobór DAF, 2, 3 acetylocholinoesterazy, 18, 19 LFA-3,20 HRF / C8bp, 4, 5 i HRF 20,21, 32 Ponadto, ich neutrofile, monocyty, limfocyty i płytki krwi również wykazują niedobór DAF.34, 40. W tym badaniu wykorzystaliśmy analizę sortowania komórek aktywowanego fluorescencyjnie w celu określenia poziomów ekspresji DAF, HRF20, acetylocholinesterazy i LFA-3.
[więcej w: ulistnienie skrętoległe, miękisz drzewny, typy wiązek przewodzących ]